近藤勇(1834～1868）
稱局長或隊長..曾向近藤周作（一名長裕）學習天然理心流劍法，很快成為代師傅和周作的養子、繼承人。
1862年前后，，近藤勇前往京都，開了一家三流道場“試衛館”，專門傳授用木刀練習的武州多摩鄉下農民劍法“天然理心流”——當然，最終弟子也只有土方歲三、沖田總司等同鄉老友。
新撰組在池田屋事件后，由于各地人斬的出現而勢力反而大為衰退。戊辰戰爭初期，伏見·鳥羽及大坂之戰的失敗，近藤被迫更名改姓逃到關東，以新撰組余黨為主體成立了甲陽鎮撫隊。
甲斐戰敗后，近藤又逃至下總山中，后來自首，被處以極刑。
土方歲三（1835～1869）
副長，近藤的摯友和左膀右臂，并被稱為新撰組的智囊（知惠袋）。
武州多摩的百姓出身，天然理心流弟子，一直跟隨在近藤身邊。他治下極嚴，有不服從者格殺勿論，故又有“鬼副長”之稱。
近藤被捕后，土方跟隨大鳥圭介轉戰關東，終于在北海道站穩了腳跟。箱館之戰，他因守衛五棱郭，被新政府軍亂槍打死，年僅35歲。
沖田總司(1844～1868）
一番隊長，出身有白河藩士和孤兒兩種說法。總司年幼時即流浪至多摩，入近藤道場學習。據說十九歲時，其劍法已經大大超越代師傅近藤勇了。
然而，劍術雖高，天不假年，在任新撰組一番隊長初期，他即不幸染上了結核病，乃至到了吐血的地步..伏見·鳥羽戰敗后，他潛至千馱谷接受治療，但未能根除病痛，終于在25歲時病故。
永倉新八（1840～1915）
二番隊長，出身松前藩。他不是近藤勇的嫡系，劍道也出自神道無念流，因此雖然甚得信任，最后還是叛離，自組“靖兵隊”。
江戶開城后，永倉轉戰關東各地與新政府軍對抗，直至會津若松的失守。不知什么原因，他獲得赦免，并恢復了松前藩籍——脫離新撰組而未遭到斬殺，并作為原新撰組重要成員而活到大正年間的，大概只有他一人。
齋藤一（1844～1915）
齋藤一是御家人山口裕助的次男，在加入新撰組以后，參加了池田屋之變，威名大盛。傳說脫隊的重要干部谷三十郎和武田觀柳齋，都是被他所暗殺的。
伊東甲子太郎入新撰組成為參謀后，齋藤一受命接近并監視他。后來與伊東同時脫隊，加入御陵衛士，并密告伊東企圖暗殺近藤勇的陰謀，斬殺了伊東。戊辰戰爭爆發后，他參加了幾乎每一場戰斗，并在會津城下代土方歲三擔任指揮，兵敗投降，遭到流放。
戰爭結束后，他改名藤田五郎，進入警視局。退役后任女子高等師范學校的校工，大正四年（1915年）9月28日歿。
